Técnica de PCR para la detección de Hepatitis B.

La PCR es una herramienta fundamental para detectar el ADN del virus de la hepatitis B (VHB). El procedimiento implica la extracción de ADN del paciente en base a una muestra de suero o plasma, seguido de su amplificación mediante ciclos de temperaturas controladas. En este caso, se aplica una variante, la PCR en tiempo real, técnica que se fundamenta en la emisión de una señal fluorescente cada vez que un compuesto fluorescente se une a una secuencia diana durante la amplificación del ADN.  Así, la intensidad de esta señal aumenta proporcionalmente a la cantidad de ADN del VHB. De esta manera, se evalúa la replicación viral, la infección activa y la infectividad del paciente. 

• Tema: Cuantificación del virus de Hepatitis B por la técnica PCR en tiempo real.
• Objetivo: Diagnosticar de forma precisa y eficiente la infección por el virus de la hepatitis B (VHB), incluyendo la cuantificación de la carga viral, para un manejo adecuado de la enfermedad en sus diferentes estadios.
• Tipo de muestra biológica: Plasma humano (puede ser suero también), obtenido de una muestra de sangre recogida con anticoagulante EDTA.
• Tipo de ácido nucleico a ser extraído: El ácido nucleico extraído será el ADN del virus de la hepatitis B (VHB) presente en suero o plasma, que puede conseguirse mediante técnicas de amplificación del ácido nucleico o mediante tecnologías que amplifican la señal.
• Gen o secuencia a amplificar: Gen S que codifica al antígeno de superficie (HBsAg), el gen C a los antígenos HBcAg y HBeAg, el gen P a la polimerasa viral y  el  gen  X  que  regula  replicación  viral  y  la  transcripción  del  genoma.
• Tipo de PCR: PCR en tiempo real (RT-PCR). 
• Visualización: Esta cuantificación se realiza mediante el ensayo Abbott RealTime HBV, el cual amplifica un fragmento específico del genoma del VHB junto con un control interno para asegurar la precisión. La cantidad de ADN viral se mide mediante fluorescencia y se expresa en Unidades Internacionales (UI) o copias por mililitro. Es posible diagnosticar la infección por VHB, cuantificar la carga viral, la progresión de la enfermedad y el genotipo del virus para la selección del tratamiento antiviral adecuado.

Referencias:

1. Rojas-Cordero E. Cuantificación del virus de la hepatitis B por la técnica PCR tiempo real. Acta méd costarric [Internet]. 2008 [citado el 14 de junio de 2024];50:13–5. Disponible en: https://www.scielo.sa.cr/pdf/amc/v50s3/art05v50s3.pdf