Generación de insulina artificial mediante ADN recombinante para el tratamiento de diabetes mellitus.

ADN recombinante artificial.

• Tema: Insulina humana obtenida por ADN recombinante a través de Escherichia coli para el tratamiento de diabetes mellitus tipo 1 y 2. [1]
• Objetivo: Obtener insulina recombinante a partir de E. coli, produciendo proinsulina mediante ADN recombinante y la selección de cepas de esta bacteria para su respectivo cultivo y procesamiento con el fin de formular insulina humana. [1]
• Gen o secuencia a clonar: Gen de la proinsulina, que luego se convertirá en insulina. [1]
• Enzimas de restricción: EcoR1. [1]
• Enzima ligasa: ADN ligasa. [1]
• Vector: Plásmido recombinante modificado pBR322. [1]
• Célula receptora: Procariota. E. coli 20, derivado de la cepa E. coli CSH50R, una de las variantes de E. coli K-12. [1]
• Mecanismo de transferencia o inserción del gen: 
• Transformación, es decir, la introducción del ADN recombinante (plásmido modificado) en la célula huésped (bacteria), mismo que se puede dar por choque térmico. [1] 
• Conjugación bacteriana. 
• Métodos de identificación de clones:
• Cultivo: Agar MacConkey-Sorbitol para cultivar E. coli durante la noche (a 37 grados C en pH neutro). Se puede agregar un antibiótico, como estreptomicina. [1]
• Cromatografía RP-HPLC: Analiza la pureza y la composición de la insulina recombinante. [1]
• Espectrofotometría: La concentración de proteína se midió a una longitud de onda de 280 nm. [1]
• Precipitación de insulina: Formación de un precipitado que se puede almacenar y usar en otras técnicas. [1]
• Reacción de citraconilación: El precursor de la insulina se trata con anhídrido citracónico para regular la digestión enzimática necesaria para formar la insulina y evitar su degradación. [1]

Ácidos nucleicos recombinantes en la naturaleza.

• ADN mitocondrial recombinante del maíz (Zea mays): En la naturaleza, la recombinación del ADN mitocondrial puede producir variantes genéticas que afectan la fertilidad, como sucede en algunas especies de maíz, ocasionando lo que se conoce como citoplasma estéril masculino (CMS). Esta condición impide la producción de polen viable debido a la recombinación de secuencias específicas en el genoma mitocondrial, dando la posibilidad de que aparezcan nuevas variantes genéticas con efectos genotípicos y fenotípicos diversos. [2]

Referencias:

1. Espinoza J, Mamani M. Insulina humana obtenida por ADN recombinante a través de Escherichia coli para el tratamiento de diabetes mellitus tipo 1 y 2. 2021. [citado el 18 de julio de 2024]. Disponible en: https://www.academia.edu/117000168/Insulina_humana_obtenida_por_ADN_recombinante_a_trav%C3%A9s_de_Escherichia_coli_para_el_tratamiento_de_diabetes_mellitus_tipo_1_y_2

2. Hanson M. Interactions of mitochondrial and nuclear genes that affect male gametophyte development. Plant Cell [Internet]. 2004 [citado el 18 de julio de 2024];16:S154–69. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15131248/